Oligo saflaştırması için Arıtma Ekipmanları

1. Jel Elektroforez Kromatografi Saflaştırma
Saflaştırma için denatüre edici poliakrilamid jel elektroforez kromatografisini kullanın.Denatüre edici madde genellikle 4M formamid veya 7M üredir, akrilamid konsantrasyonu %5-15 arasındadır ve metakrilamid oranı esas olarak %2-10 arasındadır.
Elektroforezden sonra, nükleik asit bandının konumunun ultraviyole ışınlama altında belirlenmesi gerekir, hedef nükleik asidi içeren jel kesilir, nükleik asit parçalanır ve süzülür ve ardından liç çözeltisi konsantre edilir, tuzdan arındırılır, ölçüldü ve liyofilize edildi.

2. DMT-Açık, HPLC Arıtma
Sentez sırasında DMT-On modunu seçin; ham ürün santrifüjlendi ve aminoliz sonrasında fazla amonyağın uzaklaştırılması için oda sıcaklığında konsantre edildi.
Ayırma, elüent olarak asetonitril ve %10 trietilamin-asetik asit (TEAA) içeren bir C18 kolonu kullanılarak gerçekleştirildi.Elüsyon tamamlandıktan sonra konsantre edilir ve daha sonra DMT grubu trifloroasetik asit ile çıkarılır.Nötralizasyondan sonra bazı tuzlar ve küçük moleküller bir kesme tüpü aracılığıyla uzaklaştırılır ve son olarak tuzdan arındırılır.

Bu yöntemle daha yüksek saflıkta bir ürün elde edilebilir ancak depurinasyon oluşumuna dikkat etmek gerekir.

3. DMT-Kapalı, HPLC Arıtma
Sentez sırasında DMT-Off'u seçin ve ham ürün, amonolizden sonra fazla amonyağı çıkarmak için santrifüjlendi ve oda sıcaklığında konsantre edildi.
Ayırma, elüsyon maddesi olarak su içinde asetonitril ve %10 trietilamin-asetik asit içeren bir C18 kolonu kullanılarak gerçekleştirildi.Ayırma tamamlandıktan ve miktarları belirlendikten sonra kısımlar liyofilize edilir.

Bu yöntem, ayırma koşullarının dikkatli bir şekilde ayarlanmasını gerektirir ve ayrıca nispeten saf hedef moleküller de elde edebilir.