DNA sentezi verimliliğini belirleyen faktörler

Tipik DNA, RNA ve doğal olmayan nükleik asitlerin sentezinde Korumanın Kaldırılması ve Eşleşme adımı çok önemli roller oynar.

Korumanın kaldırılması adımı, katı destek üzerindeki DMT grubunun veya önceki nükleosid üzerindeki 5' hidroksil grubunun organik asitle çıkarılması ve hidroksil grubunun bir sonraki birleştirme adımı için açığa çıkarılmasıdır.Diklorometan veya tolüen içindeki %3'lük trikloroasetik asit çoğunlukla korumanın kaldırılması adımını gerçekleştirmek için kullanılır.Trikloroasetik asit konsantrasyonu ve korumanın kaldırılması süresi (blok çözme süresi), nihai ürünlerin saflığına hakimdir.Düşük konsantrasyon ve yetersiz deblokaj süresi, DMT grubunu reaksiyona girmemiş halde bırakır, bu da verimi azaltır ve istenmeyen safsızlıkları artırır.Uzun deblokaj süresi, sentezlenen dizilerin depurininin bozulmasına yol açarak beklenmedik safsızlıkların oluşmasına neden olabilir.

Birleştirme adımı solventlerin su içeriğine ve havadaki neme duyarlıdır.Sentezdeki su konsantrasyonu 40 ppm'den az, tercihen 25 ppm'den az olmalıdır.Susuz sentez durumunu korumak için, nükleik asitlerin sentezi düşük nemli bir ortamda gerçekleştirilmelidir, bu nedenle müşterimizeAmititler Çözünmüş Ekipmanhavayla teması önlemek için toz halindeki veya yağlı Fosforamiditi susuz asetonitrilde çözebilir.

DNA sentezi verimliliğini belirleyen faktörler5
DNA sentezi verimliliğini belirleyen faktörler4

Fosforamiditlerin çözünmesi su dışı durumda daha iyi olduğundan ve reaktifler ve amidit içindeki eser suyu adsorbe edecek moleküler tuzaklar olduğundan, hazırlanması gerekir.Moleküler Tuzaklar.50-250 ml reaktif şişeleri için 2 g, 250-500 ml reaktif şişeleri için 5 g, 500-1000 ml reaktif şişeleri için 10 g ve 1000-2000 ml reaktif şişeleri için 20 g sübvansiyon öneririz.

Fosforamiditlerin çözülmesi inert atmosfer altında yapılmalı ve aktivatör reaktiflerinin ve asetonitrilin değiştirilmesi zamanında tamamlanmalıdır.Kapatma ve Oksidasyon reaktifleri mümkün olan en kısa sürede kullanılmalıdır, açılan reaktifler daha az raf ömrüne sahip olur ve sentez sırasında daha az aktivite gösterir.


Gönderim zamanı: Ağu-09-2022