DNA sentezinin temel prensibi

Kimyasal DNA sentezi, katı faz sentez stratejisine ve fosforamidit kimyasına dayanmaktadır.Biyolojik DNA sentezinden farklı olarak, kimyasal DNA sentezindeki malzeme Şekil 1'de gösterildiği gibi DMT (4, 4-dimetoksitritil) ve fosforamidit modifiyeli deoksiriboksisittir. DNA sentezi katı destek üzerinde gerçekleştirilir (çeşitli seçenekler sunabiliriz).Oligo Sentezi Sütunu), yani CPG (kontrollü gözenekli cam) ve PS (polistiren) ve tüm sentez birDNA/RNA sentezleyiciAna ekipmanımız olan HY Tek Kanallı Sentezleyici, HY-12, HY-192 vb. gibi farklı modellere sahiptir, sentez yönü 3' ila 5' arasındadır ve katı desteğe bir nükleotid tek bir yolla verilir. sentez döngüsü.Tipik bir sentez döngüsü dört adımdan oluşur: Korumanın Kaldırılması, Bağlanma, Kapatma ve Oksidasyon (Şekil 2).Korumanın Kaldırılması, katı destek üzerindeki DMT grubunu veya önceki nükleosid üzerindeki 5' hidroksil grubunu çıkaracak şekilde ayarlanır; koruma kaldırma reaktifi olarak diklorometan içindeki %3 trikloroasetik asit kullanılır.Daha sonra fosforamidit modifiyeli deoksiriboksisidin, fosfittriester (III)'ü oluşturan 5-etiltiyotetrazol veya 4, 5-disiyanoimidazol gibi bir aktivatörün yardımıyla hidroksil grubunu açığa çıkarması sağlandı ve Eşleştirme adımı gerçekleştirildi.İstenmeyen kusur dizilerinin oluşumunu en aza indirmek amacıyla birleştirme adımı sırasında reaksiyona girmemiş hidroksil grubunu bloke etmek için bir Kapatma adımı gerçekleştirilir.Son olarak, kararsız fosfittriester (III), piridin varlığında oksidan olarak iyot kullanılarak kimyasal kararlı fosfortriestere (V) oksitlenir.

Sentezlenen DNA katı destekten aminoliz yoluyla bölünebilir, fosfortriester üzerindeki 2-siyanoetil korumalı grup ve nükleobaz üzerindeki amid aynı anda bölünür, raflardaki Sentez Plakaları ve Sentez Kolonları doğrudan reaksiyon odasına yerleştirilir arasındaKorumanın Kaldırılması Ekipmanı.Talep üzerine ham DNA HPLC, elektroforez ve OPC ile hazırlanabilir.Arıtma Ekipmanlarıİşlem sonrası için.