Nükleik asit sentezi, katı faz sialik amid trigliserit yöntemi kullanılarak gerçekleştirilir; burada DNA'nın 3' ucu, katı faz substratı üzerinde immobilize edilir ve istenen DNA fragmanı sentezlenene kadar 3' ila 5' yönünde nükleotitler eklenir. .Bu, DNA polimerazın uygulanmasıyla DNA sentezinden farklıdır.
Sentez sırasında ilk bazın 3' ucu CPG üzerinde immobilize edilir, bir sonraki bazın 5'-OH'si di-p-tolil tritil DMT ile, baz üzerindeki amino grubu benzoik asit ve 3' ucu ile korunur. -OH daha sonra bir amino fosfat bileşiği ile aktive edilir.1 bazın 5 5'-OH'sinin 1 bazı ve sonraki bazın 3'-OH'si bir fosfit trigliserit oluşturur, bu daha sonra iyot ile bir fosfat trigliserite oksitlenir, ikinci baz 5'-OH üzerindeki koruyucu, dikloroasetik asit eklenmesi DM döngüsü, bir sonraki bazın eklenmesiyle gerçekleşir ve sentezden sonra 5'-OH üzerindeki koruyucu, zayıf bir asitle çıkarılır. Parça, konsantre amonyum hidroksit ile katı reçineden ayrılır, koruyucu bazdan çıkarılır. konsantre amonyum hidroksit ile ısıtılarak ısıtılır, amonyum hidroksit çıkarılır, fragman vakumla kurutulur ve nükleik asit, sıvı kromatografi veya PAGE ile saflaştırılır.
Oligo Sentezinin Adımları
Blokajı kaldırma
TCA solüsyonu eklenerek 5 uçlu DMT koruma grubu uzaklaştırılır.
Aktivasyon
Aktif oligonükleotid monomer ara maddesini oluşturmak için aktivatörün oligonükleotid monomer ile karıştırılması.
Kaplin
5-terminal hidroksil grubu, kararsız bir fosfit trigliserit bağı oluşturmak üzere bir anti-jeneratif yoğunlaşma reaksiyonunda aktif oligonükleotit ara ürünü ile reaksiyona girer.
Sınırlama
Bir kapatma maddesinin eklenmesi, yoğunlaşma reaksiyonunda yer almayan fazla hidroksil gruplarıyla bir asetilasyon kapatma reaksiyonu gerçekleştirir.
Oksidasyon
Su içeren iyot çözeltisinin eklenmesi, stabil olmayan fosfit bağlarıyla oksidasyon yoluyla reaksiyona girerek stabil fosforik asit trigliserit bağları oluşturur.
Siyanoetil Bölünme
Siyanoetil grubunu fosfat trigliserit bağından çıkarmak için DEA çözeltisinin eklenmesiyle sentezden sonra nükleik asit ürünü.
Bölünmüş ve Korumanın Kaldırılması
Nükleik asit fragmanları, konsantre bir amonyum hidroksit çözeltisinin eklenmesiyle katı faz taşıyıcıdan ayrılır ve daha sonra bazların hidrojen bağlarından koruyucu grupları çıkarmak için ısıtılır.
Gönderim zamanı: 21 Kasım 2022